淺析標本對ELISA檢測試劑盒測定結果的影響

更新時(shí)間：2020-03-24

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　　ELISA檢測試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法靈敏，特異性強不需要特殊設備，所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時(shí)常可見(jiàn)到一些錯誤結果（即假陽(yáng)性或假陰性）如標本的影響。

　　標本的影響：溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，產(chǎn)生假陽(yáng)性。所以嚴重溶血標本禁用。

　　標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。

　　標本保存不當。在冰箱中保存過(guò)久的標本，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、造成假陽(yáng)性；為克服上述干擾，ELISA檢測試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時(shí)應輕柔，不可強烈振蕩。

　　塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內會(huì )使樣本內抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會(huì )增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過(guò)氧化物酶活性。

　　標本凝固不全。在工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

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